GSTT1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408735-ACT

ヒトGSTT1は、グルタチオンS-トランスフェラーゼ・シータ1（glutathione S-transferase theta 1）をコードしており、還元型グルタチオンを求電子性化合物に抱合させる反応を触媒する第II相解毒酵素である。これにより、細胞のレドックス恒常性の維持や、外来異物（キセノバイオティクス）および酸化ストレスに対する防御を支えている。GSTT1の活性は、環境化学物質や内因性の脂質過酸化生成物のグルタチオン依存的代謝に寄与し、活性酸素種（ROS）の処理やストレス応答シグナル伝達を調節する経路とも交差する。GSTT1の遺伝的多型や欠失は、毒性物質誘発性障害への感受性の変化や、個体間における化学物質代謝の違いと関連づけられており、発がんリスク修飾因子、炎症過程、薬理ゲノミクス応答に関する研究で頻繁に検討される変数となっている。幅広い基質特異性をもつ細胞質酵素として、GSTT1はGSTファミリー内での解毒能や代償的制御を解析するためのモデルとしても用いられる。

GSTT1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GSTT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GSTT1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GSTT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGSTT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GSTT1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGSTT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGSTT1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGSTT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGSTT1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。