GSK3 beta CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400090-ACT

ヒトのGSK3Bは、グリコーゲン合成酵素キナーゼ3β（GSK3β）をコードしており、恒常的に活性をもつセリン／スレオニンキナーゼとして、栄養状態や増殖因子のシグナルを統合し、細胞運命の決定を協調的に制御します。GSK3βは、カノニカルなWnt/βカテニンシグナル伝達の主要な負の制御因子であるとともに、PI3K–AKT、インスリン／グリコーゲン代謝、Hedgehog、Notch、NF-κB関連プロセスにも関与し、転写、増殖、アポトーシス、分化に影響を与えます。βカテニンや複数の転写制御因子など多様な基質をリン酸化することにより、GSK3βは細胞骨格ダイナミクス、細胞周期制御、代謝恒常性にも作用します。GSK3Bシグナルの異常は、がん生物学、神経変性に関連する経路、炎症、代謝疾患モデルなど、さまざまな研究領域で関与が示唆されています。

GSK3 beta CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GSK3Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GSK3 beta CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GSK3B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGSK3B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GSK3 betaの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGSK3B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGSK3 beta依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGSK3B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGSK3 beta経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。