GSK-3α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400518-ACT

GSK3A codifica a glicogênio sintase quinase-3 alfa (GSK-3α), uma quinase de serina/treonina que integra múltiplos sinais de sinalização para regular o controle dependente de fosforilação do metabolismo, da proliferação e da diferenciação. A GSK-3α atua na sinalização canônica Wnt/β-catenina por meio da regulação da renovação/degradação da β-catenina e também interage com a via de sinalização insulina/PI3K–AKT, na qual a fosforilação inibitória pela AKT modula sua atividade. Por essas vias, a GSK-3α influencia a síntese de glicogênio, a progressão do ciclo celular e programas transcricionais ligados ao padrão de desenvolvimento e às respostas ao estresse celular. A atividade desregulada de GSK3A e a sinalização a jusante têm sido associadas a mecanismos relevantes para a biologia do câncer, a neurodegeneração e modelos de doenças metabólicas.

GSK-3α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GSK3A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GSK-3α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GSK3A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GSK3A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GSK-3α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GSK3A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GSK-3α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GSK-3α em células tumorais com expressão de GSK3A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.