GSK-3α CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400518-ACT

GSK3A codiert die Glykogensynthasekinase-3 alpha (GSK-3α), eine Serin/Threonin-Kinase, die mehrere Signaleingänge integriert, um die phosphorylierungsabhängige Regulation von Stoffwechsel, Proliferation und Differenzierung zu steuern. GSK-3α wirkt in der kanonischen Wnt/β-Catenin-Signalkaskade über die Regulation des β-Catenin-Umsatzes und steht außerdem in Wechselwirkung mit der Insulin/PI3K–AKT-Signalkaskade, in der eine hemmende AKT-Phosphorylierung ihre Aktivität moduliert. Über diese Signalwege beeinflusst GSK-3α die Glykogensynthese, die Zellzyklusprogression sowie Transkriptionsprogramme, die mit Entwicklungsmusterbildung und zellulären Stressantworten verknüpft sind. Eine Fehlregulation der GSK3A-Aktivität und der nachgeschalteten Signalübertragung wurde mit Mechanismen in Verbindung gebracht, die für Modelle der Krebsbiologie, Neurodegeneration und metabolischer Erkrankungen relevant sind.

GSK-3α Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GSK3A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GSK-3α Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GSK3A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GSK3A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GSK-3α-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GSK3A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GSK-3α-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GSK-3α-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GSK3A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.