GSC Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404148-ACT

O GSC humano (goosecoid homeobox) codifica um fator de transcrição com domínio homeobox que regula o padrão embrionário inicial e a especificação do mesendoderma ao controlar programas de expressão gênica ligados a decisões de destino celular e à morfogênese tecidual. O GSC participa de redes transcricionais do desenvolvimento que se integram a vias de sinalização como TGF-β/SMAD e WNT/β-catenina, influenciando a transição epitélio-mesenquimal (EMT), a migração e estados de diferenciação. A expressão desregulada de GSC tem sido associada a alterações na regulação gênica do desenvolvimento e vem sendo estudada em contextos como plasticidade de células tumorais e fenótipos invasivos, tornando-o relevante para investigar o controle transcricional da identidade de linhagem. Como uma proteína nuclear ligante de DNA, o GSC é comumente usado como marcador e regulador em modelos de desenvolvimento inicial, diferenciação de células-tronco e reprogramação transcricional associada à EMT.

GSC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GSC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GSC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GSC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GSC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GSC. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GSC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GSC no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GSC em células tumorais com expressão de GSC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.