GRP94 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423491-ACT

マウスの Hsp90b1 は、GRP94（gp96）をコードしており、タンパク質のフォールディング、品質管理、ならびに小胞体（ER）恒常性の維持を担う、小胞体常在性の HSP90 ファミリー・シャペロンです。GRP94 は、インテグリンや Toll 様受容体を含む一部の分泌タンパク質および膜タンパク質の成熟と輸送に必須であり、それによって細胞接着、自然免疫シグナル伝達、受容体介在性経路に影響を与えます。その活性は ER ストレスシグナルとアンフォールドタンパク質応答（UPR）と密接に連動しており、Hsp90b1 の制御をプロテオスタシス、炎症、ならびにストレスへの細胞適応と結び付けています。GRP94 の機能異常は、免疫表現型の変化、分泌経路生物学の破綻、がんや代謝機能障害モデルにおける疾患関連ストレス応答の異常と関連づけられています。

GRP94 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Hsp90b1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GRP94 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Hsp90b1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHsp90b1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GRP94の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHsp90b1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGRP94依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHsp90b1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGRP94経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。