Plasmide Double Nickase (h) GRP 75: sc-400471-NIC

HSPA9 code pour GRP75 (mortalin), un chaperon de la famille HSP70 mitochondriale qui soutient l'import, le repliement et le contrôle qualité des protéines codées par le noyau au sein de la matrice mitochondriale. GRP75 régule la protéostasie mitochondriale, le maintien du potentiel de membrane et les réponses adaptatives au stress, reliant l'activité de chaperonnage à l'efficacité de la phosphorylation oxydative et à l'homéostasie des espèces réactives de l'oxygène. Il participe également à la communication mitochondrie–RE et à la gestion du calcium, intégrant le dialogue entre organites au métabolisme cellulaire. Une dérégulation de la fonction HSPA9/GRP75 a été associée à des phénotypes de dysfonction mitochondriale, à une tolérance au stress altérée, ainsi qu'à des voies liées au cancer et à la neurodégénérescence où la protéostasie et le remodelage bioénergétique sont perturbés.

GRP 75 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSPA9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSPA9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSPA9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSPA9.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.