GRP 75 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400471-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GRP 75O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase GRP 75 (h) e o Plasmídeo Double Nickase GRP 75 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para HSPA9. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GRP 75 Anticorpo (D-9): sc-133137
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GRP 75 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400471-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GRP 75 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400471-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPA9 codifica a GRP75 (mortalin), uma chaperona mitocondrial da família HSP70 que dá suporte à importação, ao dobramento e ao controle de qualidade de proteínas codificadas no núcleo dentro da matriz mitocondrial. A GRP75 regula a proteostase mitocondrial, a manutenção do potencial de membrana e respostas adaptativas ao estresse, conectando a atividade de chaperona à eficiência da fosforilação oxidativa e à homeostase de espécies reativas de oxigênio. Ela também participa da comunicação mitocôndria–retículo endoplasmático e do manejo de cálcio, integrando a comunicação entre organelas ao metabolismo celular. A desregulação da função de HSPA9/GRP75 tem sido associada a fenótipos de disfunção mitocondrial, tolerância alterada ao estresse e vias relevantes para câncer e neurodegeneração, nas quais a proteostase e a remodelação bioenergética estão perturbadas.
GRP 75 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HSPA9 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HSPA9. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HSPA9. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HSPA9 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.