Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO GRP 75 (m): sc-420983
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- GRP 75 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique GRP 75, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GRP 75 Antibody (D-9): sc-133137
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO GRP 75 (m) | sc-420983 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Hspa9 code pour GRP75 (mortalin), une protéine chaperonne mitochondriale de la famille HSP70 qui soutient l’import, le repliement et la protéostasie des protéines au sein de la matrice mitochondriale. GRP75 participe au contrôle qualité mitochondrial, à la régulation de la phosphorylation oxydative et au maintien des processus liés aux centres fer–soufre et à l’hème, qui influencent l’homéostasie redox. Elle contribue également à la communication mitochondries–RE via des réseaux de chaperonnes qui modulent la gestion du calcium et la signalisation de stress. Une dérégulation de Hspa9/GRP75 a été associée à une dysfonction mitochondriale et à des phénotypes de stress cellulaire pertinents pour la neurodégénérescence, les troubles cardiométaboliques et le remodelage des voies bioénergétiques associé à la transformation cellulaire.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GRP 75 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hspa9 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hspa9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hspa9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GRP 75.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hspa9 pour l'étude de la signalisation de GRP 75, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Hspa9 essentiels à la fonction de GRP 75
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hspa9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le GRP 75 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GRP 75 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hspa9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le GRP 75 plasmide HDR (m) et le GRP 75 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hspa9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hspa9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.