Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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GRP 75 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420983
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GRP 75 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico GRP 75, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GRP 75 Anticorpo (D-9): sc-133137
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GRP 75 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420983 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Hspa9 codifica a GRP75 (mortalin), uma chaperona mitocondrial da família HSP70 que auxilia a importação e o dobramento de proteínas e a proteostase na matriz mitocondrial. A GRP75 participa do controle de qualidade mitocondrial, da regulação da fosforilação oxidativa e da manutenção de processos relacionados a centros ferro–enxofre e ao heme, que influenciam a homeostase redox. Ela também contribui para a comunicação entre mitocôndrias e retículo endoplasmático (RE) por meio de redes de chaperonas que modulam o manejo de cálcio e a sinalização de estresse. A desregulação de Hspa9/GRP75 tem sido associada à disfunção mitocondrial e a fenótipos de estresse celular relevantes para a neurodegeneração, a disfunção cardiometabólica e a remodelação de vias bioenergéticas associada à transformação celular.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GRP 75 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Hspa9 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Hspa9, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Hspa9 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GRP 75.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Hspa9 para a investigação da sinalização de GRP 75, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Hspa9 críticos para a função GRP 75
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Hspa9 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo GRP 75 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo GRP 75 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Hspa9. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo GRP 75 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR GRP 75 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Hspa9 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Hspa9 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.