GRK 4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402816

概要

GRK4はGタンパク質共役受容体キナーゼ4（GRK4）をコードしており、活性化されたGPCRをリン酸化するセリン／スレオニンキナーゼです。これによりβアレスチンのリクルート、受容体の脱感作、およびトラフィッキングが促進されます。GRK4の活性は、受容体介在性応答の強度と持続時間を調整することで、cAMP/PKAに関連する経路や下流のMAPK出力におけるシグナル伝達ダイナミクスに影響を与えます。腎臓および血管関連の文脈では、GRK4はドパミン作動性受容体の制御やナトリウム取り扱いへの影響が研究されており、血圧調節の表現型との関連が示されています。GRK4の発現変化や機能的バリアントは、GPCRシグナル伝達の恒常性が破綻する心血管・腎臓領域の研究において関連づけられてきました。

GRK 4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGRK4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GRK4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GRK4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GRK 4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GRK 4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GRK4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GRK 4の機能に不可欠なGRK4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GRK4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GRK 4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGRK 4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GRK4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GRK 4 HDRプラスミド（h）および GRK 4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGRK4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGRK4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。