granzyme K CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407038

概要

GZMKは、細胞傷害性リンパ球の顆粒内に貯蔵され、免疫シナプスで放出されて標的細胞の応答や炎症性シグナル伝達を調節する、トリプシン様のセリンプロテアーゼであるグランザイムKをコードします。グランザイムKの活性は、細胞傷害性エフェクタープログラム、細胞内基質のプロテアーゼ依存的な改変、ならびに組織障害や免疫制御に影響するアポトーシス経路およびストレス応答経路とのクロストークに関連しています。ヒト免疫においてGZMKの発現は、活性化CD8+ T細胞および一部のNK細胞サブセットに特徴的で、免疫活性化や細胞傷害性分化のマーカーとしてしばしば用いられます。GZMK発現の異常は炎症性微小環境や免疫介在性病態と関連づけられており、感染症、自己免疫、腫瘍免疫の文脈で研究対象となっています。

granzyme K CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGZMK遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GZMK内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GZMKのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、granzyme Kタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、granzyme Kシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GZMK欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• granzyme Kの機能に不可欠なGZMKエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GZMKゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• granzyme K CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびgranzyme K CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GZMK遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  granzyme K HDRプラスミド（h）および granzyme K HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGZMKホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGZMK標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。