granulysin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403208-ACT

ヒトのGNLYは、NK細胞および活性化CD8+ T細胞の細胞傷害性顆粒に蓄えられる、細胞傷害性かつ炎症促進性のエフェクタータンパク質であるグラニュリシンをコードしています。免疫シナプスが形成されると、グラニュリシンが放出され、抗菌活性を促進するとともに、パーフォリンやグランザイムと協調して標的細胞の殺傷に寄与し、自然免疫および獲得免疫応答を形作ります。GNLYの発現はリンパ球の活性化プログラムや細胞傷害性への分化状態と関連しており、その異常は免疫機能不全、慢性感染、腫瘍免疫監視、炎症性疾患の機序といった文脈で研究されています。細胞傷害性リンパ球の生物学的状態を反映する指標として、GNLYは免疫学および宿主—病原体相互作用研究において、マーカーであると同時に機能的メディエーターとしてもしばしば利用されます。

granulysin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GNLYの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

granulysin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GNLY 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGNLY転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性granulysinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGNLY遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるgranulysin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGNLY発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるgranulysin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。