GRAMD1C CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-412329

概要

GRAMD1C（GRAM domain containing 1C）は、小胞体（ER）に固定された脂質輸送タンパク質をコードしており、小胞を介さないステロール輸送および細胞内コレステロール恒常性に関与するとされています。GRAMドメイン依存的な膜センシングと脂質に富む膜との相互作用を介して、GRAMD1CはER―オルガネラ間のコンタクトサイトの生物学や、膜脂質組成の制御と関連づけられています。これらの過程は、ミトコンドリア機能、オートファジー／マイトファジー、ならびに細胞のエネルギー代謝を制御する経路と交差しており、GRAMD1Cは脂質駆動性のオルガネラ間クロストークを研究する上で有用な結節点となります。GRAMD1Cの発現や機能の変化は、代謝表現型やがん関連の細胞状態との関係で検討されてきており、疾患モデルにおける脂質代謝の機序研究においてその重要性が支持されています。

GRAMD1C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGRAMD1C遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GRAMD1C内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GRAMD1Cのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GRAMD1Cタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GRAMD1Cシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GRAMD1C欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GRAMD1Cの機能に不可欠なGRAMD1Cエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GRAMD1Cゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GRAMD1C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGRAMD1C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GRAMD1C遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GRAMD1C HDRプラスミド（h）および GRAMD1C HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGRAMD1Cホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGRAMD1C標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。