Particules Lentivirales d'Activation (m) GPSM3: sc-430655-LAC

Le gène murin **Gpsm3** code **GPSM3**, un régulateur de la signalisation des protéines G hétérotrimériques contenant un motif GoLoco, qui se lie aux sous-unités **Gα** chargées en GDP et module la propagation des signaux induits par les récepteurs. En ajustant les voies dépendantes de **Gαi**, GPSM3 influence la dynamique des seconds messagers en aval et intègre les signaux provenant des réseaux de chimiokines et d’autres **GPCR** qui contrôlent la migration et l’activation des leucocytes. L’expression de GPSM3 est enrichie dans les lignées de cellules immunitaires, ce qui l’associe à des programmes de signalisation inflammatoire et à l’homéostasie de l’immunité innée. Une dérégulation des voies de signalisation associées à GPSM3 a été étudiée dans le contexte de mécanismes de maladies à médiation immunitaire, faisant de cette protéine une cible utile pour disséquer les circuits **GPCR–protéine G** dans des modèles murins.

Les particules d'activation lentivirales GPSM3 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Gpsm3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GPSM3 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Gpsm3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GPSM3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Gpsm3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.