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GPR35慢病毒激活颗粒(h) | sc-416792-LAC | 200 µl | $455.00 |
GPR35 编码一种视紫红质样的 G 蛋白偶联受体,可在免疫组织和胃肠道组织中作为化学感受器发挥功能,并主要通过 Gi/o 信号通路偶联,调控 cAMP 水平、钙离子通量以及下游的 MAPK 通路。已报道的配体包括与微生物群及代谢相关的小分子,使 GPR35 处于环境感知与炎症调控的交汇点。在人类细胞中,GPR35 的活性会影响白细胞迁移、上皮屏障应答以及细胞因子信号程序,从而塑造黏膜稳态。GPR35 表达或信号的改变与炎症性肠病相关机制及肿瘤微环境生物学有关,因此可用于免疫代谢与 GPCR 信号网络研究。
GPR35 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 GPR35 表达。
GPR35 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在GPR35转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性GPR35表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 GPR35 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。