GPR172A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405622

概要

SLC52A2は、ヒトのリボフラビントランスポータータンパク質GPR172A（RFVT2）をコードしている。GPR172A（RFVT2）は細胞膜上の輸送担体として機能し、FMNおよびFADという必須フラビン補酵素の前駆体であるリボフラビン（ビタミンB2）の細胞内取り込みを担う。フラボタンパク質依存性の酸化還元反応、ミトコンドリアの酸化的代謝、ならびに抗酸化防御を維持することで、GPR172Aは電子伝達、脂肪酸酸化、さらには細胞全体のエネルギーホメオスタシスを含む経路を支える。リボフラビン輸送が障害されると、フラビン依存性酵素の活性が乱れ、神経代謝機能障害と関連する。SLC52A2の遺伝的変異は、末梢神経および中枢神経系の機能に影響するリボフラビントランスポーター欠損症候群と関連しており、栄養素輸送やミトコンドリアのストレス応答の研究において重要である。

GPR172A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC52A2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC52A2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC52A2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GPR172Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GPR172Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC52A2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GPR172Aの機能に不可欠なSLC52A2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC52A2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GPR172A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGPR172A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC52A2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GPR172A HDRプラスミド（h）および GPR172A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC52A2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC52A2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。