GPR120 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401362-ACT

FFAR4 は GPR120 をコードしており、GPR120 は長鎖脂肪酸を感知する G タンパク質共役型受容体（GPCR）です。Gαq/11 依存性および β-アレスチン依存性のシグナル伝達に共役し、細胞内カルシウム動態や転写プログラムを調節します。代謝組織や免疫細胞において、GPR120 は脂質の感知、炎症シグナル、インスリン感受性を高める経路に影響し、栄養状態を細胞ストレス応答やサイトカイン産生へと結び付けます。下流のプロセスとしては、MAPK/ERK シグナルの制御、NF-κB に関連する炎症カスケード、脂肪細胞分化プログラムの調節などが報告されています。FFAR4/GPR120 活性の破綻は、肥満に関連する代謝表現型、インスリン抵抗性、慢性炎症状態と関連づけられており、脂肪細胞、マクロファージ、上皮細胞モデルにおける機序研究が進められています。

GPR120 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FFAR4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPR120 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FFAR4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFFAR4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPR120の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFFAR4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPR120依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFFAR4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPR120経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。