Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GPI Plasmide Double Nickase (h): sc-402796-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPI Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPI Double Nickase Plasmid (h) e il GPI Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPI. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GPI Antibody (H-10): sc-365066
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPI Plasmide Double Nickase (h) | sc-402796-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPI Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402796-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La glucosio-6-fosfato isomerasi (GPI) è un enzima citosolico che catalizza la conversione reversibile del glucosio-6-fosfato in fruttosio-6-fosfato, collegando glicolisi e gluconeogenesi e influenzando l’equilibrio energetico cellulare. Modellando il flusso di carbonio attraverso il metabolismo centrale, GPI può incidere sull’omeostasi redox e sulla disponibilità di precursori biosintetici in cellule proliferanti e adattate allo stress. Oltre al suo ruolo enzimatico canonico, a seconda del contesto GPI è stata implicata in attività di segnalazione extracellulare in grado di modulare la motilità cellulare e le interazioni con il microambiente. Alterazioni genetiche o funzionali di GPI sono associate a disregolazione metabolica e sono state studiate in relazione ad anemia e fenotipi del neurosviluppo, oltre che a caratteristiche metaboliche osservate in modelli di cancro.
GPI Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPI nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPI. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPI. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPI interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.