Plasmide Double Nickase (h) GP78: sc-402346-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GP78 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GP78 Double Nickase (h) et le plasmide GP78 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AMFR. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GP78 Antibody (3D9): sc-293371
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GP78 | sc-402346-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GP78 | sc-402346-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AMFR humain code GP78, une ligase E3 ubiquitine de type RING résidente du réticulum endoplasmique (RE), essentielle à la dégradation associée au RE (ERAD) et au contrôle de la protéostasie par le système ubiquitine–protéasome. GP78 coopère avec des enzymes E2 et des composants de l’ERAD pour ubiquitinyler des substrats mal repliés ou régulés, influençant la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées, l’homéostasie des lipides et du cholestérol, ainsi que l’adaptation cellulaire plus large au stress. Par ces processus, AMFR/GP78 a été étudiée dans des contextes de stress chronique du RE, d’altération du renouvellement des protéines et de voies associées à la signalisation oncogénique et à des phénotypes liés aux métastases dans des systèmes modèles. Son rôle dans le contrôle qualité médié par l’ubiquitine recoupe aussi la dynamique mitochondriale et le dialogue avec l’autophagie, ce qui en fait une cible pertinente pour disséquer les réseaux de réponse au stress.
GP78 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AMFR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AMFR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AMFR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AMFR.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.