Date published: 2026-7-14

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GP78 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-402346-NIC

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데이터 시트
  • Target species: human
  • 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
  • GP78 Double Nickase Plasmid (h) 는 한쌍의D10A mutated Cas9 nuclease 와 타깃특정 20 nt guide RNA (gRNA)를 인코딩하는 plasmid를 포함하고있으며 gRNA는 대응 CRISPR/Cas9 KO보다 높은 특이성을 띤 knockout gene을 발현하도록 디자인되였습니다.
  • 한쌍의 gRNA는 약 20bp가량 떨어져 있으며 이는 게놈DNA의 Cas9-mediated double nicking을 발생하여 DSB를 모방합니다.
  • 한쌍의 plasmid 중 하나는 selection에 필요한 puromycin-resistance gene을, 다른하나는 형질주입효율을 확인하는 GFP marker를 보유하고있습니다.
  • GP78 더블 니케이스 플라스미드 (h) 및 GP78 더블 니케이스 플라스미드 (h2)는 AMFR을 표적하는 서로 다른 쌍을 이루는 gRNA 설계를 암호화합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 이용 가능할 수 있습니다
  • Transfection, gene knockout효율은 WB, IF나 IHC등 방법으로 측정할수있습니다, 권장하는 항체는 GP78 Antibody (3D9): sc-293371
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    주문정보

    제품명카탈로그 번호 단위가격수량관심품목

    GP78 더블 틈내기효소 플라스미드 (h)

    sc-402346-NIC
    20 µg
    $410.00

    GP78 더블 틈내기효소 플라스미드 (h2)

    sc-402346-NIC-2
    20 µg
    $410.00

    인간 AMFR 유전자는 소포체(endoplasmic reticulum, ER)에 상주하는 RING형 E3 유비퀴틴 리가아제인 GP78을 암호화하며, 이는 소포체-연관 분해(ER-associated degradation, ERAD)와 유비퀴틴–프로테아좀 시스템을 통한 단백질 항상성(proteostasis) 조절의 핵심 요소이다. GP78은 E2 효소 및 ERAD 구성요소들과 협력하여 오접힘(misfolded) 단백질이나 조절 대상 기질을 유비퀴틴화하며, 그 결과 미접힘 단백질 반응(unfolded protein response, UPR) 신호전달, 지질 및 콜레스테롤 항상성, 그리고 더 광범위한 세포 스트레스 적응에 영향을 미친다. 이러한 과정들을 통해 AMFR/GP78은 만성 ER 스트레스, 변화된 단백질 턴오버, 그리고 모델 시스템에서 종양성(oncogenic) 신호 및 전이 관련 표현형과 연결된 경로의 맥락에서 연구되어 왔다. 또한 유비퀴틴 매개 품질 관리에서의 역할은 미토콘드리아 역학 및 자가포식(autophagy) 관련 상호작용과도 교차하므로, 스트레스 반응성 네트워크를 규명하는 데 중요한 표적이 된다.

    GP78 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 AMFR 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 AMFR 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 AMFR의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.

    편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, AMFR 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.

    연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.