golgin 97 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403152-ACT

GOLGA1は、transゴルジネットワーク（TGN）に豊富に局在するコイルドコイル構造の周辺膜タンパク質であるゴルジン97をコードしており、ゴルジ体の構築維持を助けるとともに、ゴルジ体以降（post-Golgi）輸送における小胞のテザリングを支えます。ゴルジ体・エンドソーム・細胞膜の間でカーゴのソーティングおよび逆行性輸送経路を協調させることで、ゴルジン97は膜恒常性と分泌経路の組織化の忠実性に寄与します。ゴルジ体のテザリングや輸送因子の異常は、受容体リサイクリングの変化、ストレス応答、糖鎖付加酵素の誤局在と関連しており、これらの過程は神経変性、感染生物学、がん細胞の表現型研究でしばしば検討されます。TGNダイナミクスのマーカー兼制御因子として、ゴルジン97は、細胞ストレス下でのオルガネラ構造、小胞輸送の動態（速度論）、プロテオスタシスを評価するアッセイで一般的に研究されています。

golgin 97 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GOLGA1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

golgin 97 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GOLGA1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGOLGA1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性golgin 97の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGOLGA1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるgolgin 97依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGOLGA1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるgolgin 97経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。