golgin 160 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403862-NIC

GOLGA3はgolgin 160をコードしており、golgin 160はゴルジ体に局在するコイルドコイル構造をもつゴルジンで、ゴルジ体の構築（アーキテクチャ）の組織化を助け、エンド膜系コンパートメント間の小胞の係留（テザリング）および輸送を支えます。分泌経路の一部として、golgin 160は貨物（カーゴ）の選別やゴルジリボン構造の完全性維持に寄与し、タンパク質のプロセシングと下流の送達先への輸送に影響します。ゴルジ体の係留・輸送プログラムの破綻は、細胞ストレス応答、シグナル伝達の変化、細胞極性や遊走の変化と関連しているため、GOLGA3はオルガネラの組織化と疾患関連表現型を結び付ける機構の研究において重要な標的となります。生物医学研究では、golgin 160の機能は膜動態、分泌経路の制御、ならびにゴルジ体依存的なプロテオスタシスの攪乱という文脈で検討されることが多いです。

golgin 160 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GOLGA3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GOLGA3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GOLGA3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GOLGA3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。