GODZ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403970-ACT

ZDHHC3, também conhecido como GODZ, codifica uma palmitoil aciltransferase da família DHHC que catalisa a S-palmitoilação de resíduos de cisteína citosólicos em proteínas-alvo, regulando sua associação à membrana, tráfego, estabilidade e saída de sinalização. Essa modificação lipídica influencia o transporte vesicular e a compartimentalização de receptores e canais, moldando assim redes de sinalização sinápticas e próximas à membrana. Por seu papel na modificação pós-traducional e na proteostase, o ZDHHC3 tem sido associado a desregulação da comunicação celular e a respostas ao estresse frequentemente investigadas na biologia do câncer e de doenças neurológicas. Como resultado, o ZDHHC3 é comumente estudado para entender como o remodelamento dependente de palmitoilação de microdomínios de membrana afeta a ativação de vias e fenótipos celulares.

GODZ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZDHHC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GODZ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZDHHC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZDHHC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GODZ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZDHHC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GODZ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GODZ em células tumorais com expressão de ZDHHC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.