GnT-II Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407393

Visão geral

MGAT2 codifica a N-acetilglucosaminiltransferase II (GnT-II), uma glicosiltransferase do Golgi medial que catalisa uma etapa-chave na síntese de N-glicanos complexos ao adicionar GlcNAc na ligação β1,2 ao braço de manose α1,6 de estruturas biantenárias. Essa atividade influencia a maturação de glicoproteínas que regulam o tráfego de receptores, a adesão célula–célula e a sinalização por fatores de crescimento, moldando assim a proteostase de membrana e as interações extracelulares. Alterações no ramificação e na composição de N-glicanos dependentes de MGAT2 têm sido associadas à desregulação da sinalização celular e a mudanças em migração e invasividade em contextos relevantes para o câncer, e também estão ligadas a distúrbios congênitos da glicosilação envolvendo processamento deficiente no Golgi. Por isso, MGAT2 é frequentemente estudado em glicoproteômica, biologia da via secretória e análises em nível de vias de remodelamento de N-glicanos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GnT-II (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MGAT2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MGAT2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MGAT2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GnT-II.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MGAT2 para a investigação da sinalização de GnT-II, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MGAT2 críticos para a função GnT-II
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MGAT2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GnT-II Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GnT-II Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MGAT2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GnT-II Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GnT-II (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MGAT2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MGAT2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.