GM2/GD2 Synthase Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403592-NIC

B4GALNT1 codifica a sintase de GM2/GD2, uma β1,4-N-acetilgalactosaminiltransferase residente no Golgi que catalisa a conversão de gangliosídeos derivados de lactosilceramida em GM2 e GD2, moldando a composição dos glicosfingolipídios na membrana plasmática. Ao regular a biossíntese de gangliosídeos, essa enzima influencia a organização de microdomínios de membrana, a sinalização de receptores e as interações célula–célula, conectando o estado de glicosilação a vias que controlam adesão e transdução de sinal. Perfis alterados de gangliosídeos e a atividade de B4GALNT1 têm sido associados a mudanças no desenvolvimento neural e a fenótipos neurodegenerativos, sendo frequentemente investigados em contextos nos quais a remodelação de glicosfingolipídios afeta a identidade celular e respostas ao estresse. Como uma enzima nodal no metabolismo de glicolipídios, B4GALNT1 é um alvo útil para dissecar como a estrutura dos glicanos modula o tráfego de proteínas, o reconhecimento imune e a apresentação de antígenos de superfície.

GM2/GD2 Synthase O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus B4GALNT1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de B4GALNT1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função B4GALNT1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com B4GALNT1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.