GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420474

概要

B4galnt1はGM2/GD2合成酵素をコードしており、この酵素はゴルジ体に局在する糖転移酵素として、ガングリオシド前駆体にN-アセチルガラクトサミンを転移してGM2およびGD2を生成し、細胞膜における糖脂質（グリコスフィンゴ脂質）の組成を規定します。ガングリオシド量を制御することで、リピドラフトの構造、細胞間相互作用、ならびに神経発生やシナプス機能に重要なシグナル伝達過程に影響を与えます。マウス組織では、B4galnt1の活性がミエリン関連糖脂質のパターン形成に寄与し、さらに糖脂質を介した認識イベントの調節を通じて神経免疫恒常性にも関与します。ガングリオシド生合成の破綻は神経学的表現型や細胞表面抗原ランドスケープの変化と関連することから、B4galnt1は神経生物学および膜生物学における機序解明研究の重要な標的となっています。

GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるB4galnt1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、B4galnt1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、B4galnt1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GM2/GD2 synthaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GM2/GD2 synthaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、B4galnt1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GM2/GD2 synthaseの機能に不可欠なB4galnt1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、B4galnt1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、B4galnt1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GM2/GD2 synthase HDRプラスミド（m）および GM2/GD2 synthase HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはB4galnt1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のB4galnt1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。