GlyR α4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416048-ACT

GLRA4 codifica a subunidade alfa 4 do recetor de glicina (GlyR α4), um componente de um canal de cloreto ativado por ligando que contribui para a neurotransmissão inibitória rápida no sistema nervoso central, ao mediar a hiperpolarização dependente de glicina. Os complexos GlyR regulam a excitabilidade neuronal e a sincronização de redes através da condução de cloreto e da interação com outras vias inibitórias, incluindo a sinalização GABAérgica. Embora o GLRA4 esteja menos bem caracterizado do que outros membros da família GLRA, a biologia dos recetores glicinérgicos está amplamente associada ao controlo motor, aos circuitos de sobressalto e ao equilíbrio da inibição sináptica — processos frequentemente implicados em fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos. O estudo do GLRA4 apoia investigações mecanísticas sobre a montagem de recetores, a função sináptica e alterações na sinalização inibitória relevantes para perturbações do sistema nervoso, sem implicar desfechos clínicos.

GlyR α4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GLRA4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GlyR α4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GLRA4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GLRA4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GlyR α4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GLRA4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GlyR α4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GlyR α4 em células tumorais com expressão de GLRA4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.