Glycophorin C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405123-ACT

GYPC は、ヒト赤血球膜の主要なシアル酸含有糖タンパク質であるグリコフォリンCをコードしており、赤血球膜の完全性と表面電荷の維持に寄与します。グリコフォリンCは、膜貫通タンパク質と、その下層にあるスペクトリン–アクチン骨格との連結を支える相互作用を介して膜細胞骨格ネットワークの一部を形成し、循環中の赤血球の変形能と安定性に影響します。GYPC の遺伝的多様性や発現変化は、赤血球膜の表現型や血液型抗原の多様性と関連しており、赤血球の構造異常や、赤血球に影響を及ぼす宿主–病原体相互作用の観点から研究されています。膜にアンカーされた糖タンパク質として、グリコフォリンCは赤芽球系の分化プログラムや膜タンパク質輸送を解析するための扱いやすいモデルにもなっています。

Glycophorin C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GYPCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Glycophorin C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GYPC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGYPC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Glycophorin Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGYPC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGlycophorin C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGYPC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGlycophorin C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。