Glycophorin A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417801-ACT

O GYPA codifica a glicoforina A, uma sialoglicoproteína altamente abundante da membrana do eritrócito humano que contribui para a carga de superfície das hemácias, a estabilidade da membrana e as interações com o meio extracelular. Como um dos principais carreadores dos antígenos do grupo sanguíneo MNS, o GYPA participa da definição da identidade antigênica dos eritrócitos e influencia processos como reconhecimento célula–célula e compatibilidade imunológica. Variações na expressão ou na sequência de GYPA são relevantes para fenótipos hematológicos e para a imunologia de transfusão, e o gene é frequentemente usado como marcador de linhagem em estudos de eritropoiese e diferenciação de hemácias. A biologia da glicoforina A também é explorada para investigar interações hospedeiro–patógeno na superfície eritrocitária e mecanismos que governam o tráfego de proteínas de membrana e a glicosilação em células eritroides.

Glycophorin A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GYPA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Glycophorin A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GYPA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GYPA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Glycophorin A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GYPA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Glycophorin A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Glycophorin A em células tumorais com expressão de GYPA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.