Plasmide Double Nickase (m) Glutathione Peroxidase 4/GPX4: sc-436949-NIC

Le gène murin **Gpx4** code la glutathion peroxydase 4 (GPX4), une sélénoenzyme qui réduit les hydroperoxydes de phospholipides au sein des membranes cellulaires en utilisant le glutathion, préservant ainsi l’intégrité membranaire et l’homéostasie rédox. GPX4 est un suppresseur central de la ferroptose en limitant la peroxydation lipidique induite par le fer et s’inscrit dans des réseaux antioxydants tels que le métabolisme du glutathion et la réponse au stress oxydant régulée par NRF2. Une perturbation de la fonction de GPX4 modifie la signalisation mitochondriale et lipidique, influence les réponses inflammatoires au stress et affecte la survie cellulaire en contexte de stress oxydant et métabolique. Une activité dérégulée de GPX4 a été impliquée, dans des modèles expérimentaux, dans la neurodégénérescence, les lésions d’ischémie-reperfusion et la biologie tumorale, via son contrôle de la peroxydation lipidique et de la sensibilité à la ferroptose.

Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Gpx4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Gpx4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Gpx4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Gpx4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.