GLUD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402187

概要

GLUD1はミトコンドリア型グルタミン酸脱水素酵素1（GDH1）をコードしており、これはNAD(P)+依存性の酵素で、グルタミン酸をα-ケトグルタル酸とアンモニアへ可逆的に酸化的脱アミノ化する反応を触媒する。これにより、アミノ酸代謝をTCA回路および細胞のレドックス恒常性と結び付けている。グルタミノリシスと酸化的代謝の間のフラックスを制御することで、GLUD1はミトコンドリアのエネルギー代謝、窒素の処理、ならびに中心炭素代謝に対するアナプレロティックな補充に影響を与える。GDH1活性の変化は、インスリン分泌や興奮性神経伝達物質の恒常性に関わる代謝調節異常と関連づけられており、GLUD1はミトコンドリア代謝および神経内分泌シグナル伝達の研究において重要な標的となっている。

GLUD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGLUD1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GLUD1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GLUD1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GLUD1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GLUD1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GLUD1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GLUD1の機能に不可欠なGLUD1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GLUD1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GLUD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGLUD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GLUD1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GLUD1 HDRプラスミド（h）および GLUD1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGLUD1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGLUD1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。