Glucosidase IIβ Plasmide Double Nickase (h): sc-404394-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Glucosidase IIβ Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Glucosidase IIβ Double Nickase Plasmid (h) e il Glucosidase IIβ Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PRKCSH. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Glucosidase IIβ Antibody (H-4): sc-374457
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Glucosidase IIβ Plasmide Double Nickase (h) | sc-404394-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Glucosidase IIβ Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404394-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKCSH codifica la subunità β della glucosidasi II, un complesso enzimatico luminale del reticolo endoplasmatico (RE) che rimuove residui di glucosio dai glicani N-legati durante la maturazione delle glicoproteine. Questa fase di processamento sostiene il ciclo di controllo qualità calnexina/calreticulina e contribuisce a coordinare la degradazione associata al RE (ERAD) delle proteine mal ripiegate, collegando la funzione di PRKCSH alla proteostasi e alla segnalazione della risposta alle proteine non correttamente ripiegate. L’alterazione dell’attività della glucosidasi IIβ può perturbare la secrezione e l’espressione in superficie delle glicoproteine, modificando la segnalazione cellulare e l’adattamento allo stress. Le varianti genetiche di PRKCSH sono state associate alla malattia epatica policistica autosomica dominante, rendendolo rilevante per studi di biologia epiteliale, stress degli organelli e vie dipendenti dalle glicoproteine.
Glucosidase IIβ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PRKCSH nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PRKCSH. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PRKCSH. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PRKCSH interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.