Plasmide CRISPR d'Activation (h) GLTSCR1: sc-409913-ACT

GLTSCR1 (glioma tumor suppressor candidate region gene 1) code une protéine nucléaire impliquée dans la régulation transcriptionnelle et des processus associés à la chromatine, qui influencent le contrôle du cycle cellulaire et les programmes de différenciation. Des interactions rapportées avec la machinerie transcriptionnelle et épigénétique suggèrent un rôle dans la coordination des états d’expression génique et le maintien de l’organisation nucléaire. Une expression altérée de GLTSCR1 ou des perturbations génomiques ont été associées à des loci liés au cancer, notamment à des régions pertinentes pour le gliome, ce qui étaye son utilisation comme modulateur dépendant du contexte des programmes transcriptionnels oncogéniques. Ainsi, GLTSCR1 présente un intérêt pour l’étude du remodelage des voies impliquées dans la signalisation proliférative, la régulation de la chromatine et les réseaux d’expression génique sensibles au stress.

GLTSCR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GLTSCR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GLTSCR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GLTSCR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GLTSCR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GLTSCR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GLTSCR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GLTSCR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GLTSCR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GLTSCR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.