girdin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430846

概要

マウスのCcdc88aはgirdin（GIVとも呼ばれる）をコードしており、girdinはヘテロ三量体Gタンパク質および受容体型チロシンキナーゼからのシグナルを統合して、アクチンのリモデリング、細胞極性、方向性移動を協調的に制御する大型の細胞質スキャフォールドタンパク質です。girdinは先導端に局在し、細胞骨格制御因子と結合して、ラメリポディア形成、小胞輸送、上皮組織化といった過程に影響を与えます。また、PI3K–AKTシグナル伝達の動態や細胞増殖・生存プログラムの制御にも関与するとされ、組織形態形成や病的な細胞運動性の研究において重要です。接着や遊走の変化が病態進展に関与する多様な疾患状況で、girdin関連経路の異常が報告されており、マウスモデル系での機序解明研究を支持します。

girdin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCcdc88a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ccdc88a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ccdc88aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、girdinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、girdinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ccdc88a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• girdinの機能に不可欠なCcdc88aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ccdc88aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• girdin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびgirdin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ccdc88a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  girdin HDRプラスミド（m）および girdin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCcdc88aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCcdc88a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。