GHR CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420549-ACT

マウスのGhrは成長ホルモン受容体（GHR）をコードしており、成長ホルモンと結合して体の成長、代謝、組織恒常性を調節する膜貫通型サイトカイン受容体です。リガンド結合により受容体の二量体化とJAK2の活性化が促進され、下流のSTAT5シグナルが駆動されるほか、PI3K–AKT経路やMAPK/ERK経路とのクロストークを通じて、増殖・分化・栄養利用に関わる転写プログラムを制御します。GHRの活性は肝臓におけるIGF-1産生を形作り、脂肪、筋、骨の生理にも影響するため、成長とエネルギーバランスの内分泌制御の中核を担います。GHRシグナルの異常は成長表現型の変化や代謝機能障害と関連することが示されており、発生生物学、老化、内分泌経路の再構築といった文脈で頻繁に研究されています。

GHR CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ghrの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GHR CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ghr 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGhr転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GHRの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGhr遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGHR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGhr発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGHR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。