GFRα-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420539

概要

Gfra1はGFRα-1をコードしており、GFRα-1はグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の共受容体として、グリア細胞株由来神経栄養因子（GDNF）に結合し、それをRETチロシンキナーゼに提示して下流シグナル伝達を開始します。このリガンド–受容体複合体は、PI3K–AKT、MAPK/ERK、PLCγ依存性シグナル伝達などの経路を介して、神経細胞の生存、神経突起伸長、分化を制御し、さらに神経堤由来組織においても追加の役割を担います。マウスでは、GFRα-1の活性は腎臓の形態形成や精原幹細胞の維持にも関与するとされており、発生および組織恒常性プログラムにおけるより広範な機能を反映しています。GDNF–GFRα-1–RETシグナルの破綻（調節異常）は、神経発生異常、神経変性、ならびにRET駆動性の細胞表現型を実験モデルで研究するための機序的枠組みとして広く用いられています。

GFRα-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGfra1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Gfra1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Gfra1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GFRα-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GFRα-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Gfra1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GFRα-1の機能に不可欠なGfra1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Gfra1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GFRα-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGFRα-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Gfra1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GFRα-1 HDRプラスミド（m）および GFRα-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGfra1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGfra1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。