GDF-9B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403596-ACT

BMP15 codifica o fator de diferenciação do crescimento 9B (GDF-9B), um membro da superfamília TGF-β derivado do oócito que regula a proliferação e a diferenciação das células da granulosa durante a foliculogênese. O GDF-9B sinaliza por meio das vias BMP/SMAD, influenciando programas transcricionais que coordenam o crescimento do folículo ovariano, a comunicação entre oócito e células somáticas e o remodelamento da matriz extracelular. Alterações na atividade de BMP15 estão associadas a fenótipos reprodutivos, incluindo comprometimento da função ovariana e características relacionadas à infertilidade, tornando-o relevante para estudos do desenvolvimento gonadal e da regulação endócrina. Além disso, a comunicação cruzada (cross-talk) de BMP15/GDF-9B com ligantes e receptores relacionados fornece um modelo acessível para dissecar a sinalização dependente do contexto na família TGF-β.

GDF-9B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BMP15 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GDF-9B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BMP15 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BMP15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GDF-9B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BMP15 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GDF-9B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GDF-9B em células tumorais com expressão de BMP15 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.