Plasmide CRISPR d'Activation (h) GCNT4: sc-412177-ACT

GCNT4 (glucosaminyl-(N-acétyl)-transférase 4) code une glycosyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse le branchement β1,6 de la N‑acétylglucosamine sur les O‑glycanes de type mucine, façonnant la structure et l’abondance de glycoconjugués complexes à la surface cellulaire et dans les mucines sécrétées. En modulant le branchement des glycannes, GCNT4 influence le trafic des glycoprotéines, les interactions récepteur–ligand et la signalisation médiée par les lectines, avec des effets en aval sur la différenciation épithéliale, la fonction barrière et l’adhérence cellule–cellule. Des programmes d’O‑glycosylation altérés sont fréquemment associés à des modifications de la reconnaissance immunitaire et à des phénotypes de glycannes liés aux tumeurs, ce qui fait de GCNT4 un nœud pertinent pour étudier le remodelage dépendant de la glycosylation dans des contextes pathologiques. Les chercheurs étudient couramment l’activité de GCNT4 dans les voies régissant la biosynthèse des mucines, le branchement des glycannes et la maturation des glycoprotéines membranaires.

GCNT4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GCNT4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GCNT4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GCNT4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GCNT4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GCNT4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GCNT4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GCNT4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GCNT4 dans les cellules tumorales présentant une expression de GCNT4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.