GCNT4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412177-ACT

GCNT4（glucosaminyl（N-acetyl）transferase 4）は、ゴルジ体に局在する糖転移酵素をコードしており、ムチン型O-結合型糖鎖におけるβ1,6-N-アセチルグルコサミンの分岐形成を触媒します。これにより、細胞表面や分泌ムチンに存在する複雑な糖鎖複合体（グリココンジュゲート）の構造と量が規定されます。糖鎖分岐を調節することで、GCNT4は糖タンパク質の輸送、受容体—リガンド相互作用、レクチン介在性シグナル伝達に影響を及ぼし、結果として上皮分化、バリア機能、細胞—細胞接着に下流効果をもたらします。O-糖鎖付加プログラムの変化は、免疫認識の変化や腫瘍関連の糖鎖表現型としばしば結び付けられるため、GCNT4は疾患状況における糖鎖依存的リモデリングを研究する上で重要なノードとなります。研究者は一般に、ムチン生合成、糖鎖分岐、膜糖タンパク質成熟を制御する経路においてGCNT4活性を解析します。

GCNT4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GCNT4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GCNT4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GCNT4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGCNT4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GCNT4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGCNT4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGCNT4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGCNT4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGCNT4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。