GCM1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403269-ACT

ヒトGCM1（glial cells missing homolog 1）は系譜特異的な転写因子であり、合胞体栄養膜（syncytiotrophoblast）の形成や、ホルモン産生・細胞融合・栄養交換に関与する遺伝子の制御を含む、栄養膜細胞の分化および胎盤発生において中心的な役割を担います。GCM1は特定のプロモーター／エンハンサー要素に結合することで、発生シグナルを、母体—胎児界面における細胞運命決定、浸潤、血管リモデリングを制御する転写プログラムと統合します。GCM1の発現や活性の変化は、胎盤機能障害の表現型や不良な妊娠転帰と関連づけられており、栄養膜成熟不全および胎盤機能不全の背景にある経路を研究するうえで重要です。さらに、その下流ネットワークはストレス、低酸素、増殖因子応答性の転写回路と交差しており、栄養膜幹細胞、胎盤オルガノイド、ならびに関連する上皮系のコンテキストでモデル化できます。

GCM1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GCM1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GCM1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GCM1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGCM1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GCM1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGCM1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGCM1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGCM1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGCM1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。