Plasmide Double Nickase (h) GCKR: sc-401623-NIC

GCKR code la protéine régulatrice de la glucokinase (GKRP), un modulateur de la détection du glucose enrichi dans les hépatocytes, qui contrôle l’activité de la glucokinase (GCK) par séquestration et libération en réponse à des signaux métaboliques. En régulant le flux glycolytique hépatique, la synthèse du glycogène et la lipogenèse de novo, GCKR influence l’homéostasie centrale glucides–lipides ainsi que la signalisation liée à l’insuline. Des variations génétiques ou une expression altérée de GCKR ont été associées à des modifications de la glycémie à jeun, des taux de triglycérides et, plus largement, de phénotypes de traits métaboliques, ce qui en fait un nœud d’intérêt pour l’étude de l’équilibre énergétique et des programmes transcriptionnels sensibles aux nutriments. Les travaux sur GCKR permettent une exploration mécanistique du métabolisme hépatique, de la communication endocrine et des réponses au stress métabolique dans des modèles cellulaires pertinents.

GCKR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GCKR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GCKR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GCKR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GCKR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.