GBX2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404749-ACT

GBX2 (gastrulation brain homeobox 2) codifica un fattore di trascrizione homeobox che regola la regionalizzazione e le decisioni di destino cellulare durante l’embriogenesi precoce e lo sviluppo del sistema nervoso. Nelle cellule umane, GBX2 coordina programmi trascrizionali coinvolti nella specificazione neurale lungo l’asse antero-posteriore e interagisce con reti di segnalazione dello sviluppo, incluse le vie WNT/β-catenina, FGF e quelle responsibili all’acido retinoico. Un’espressione deregolata di GBX2 è stata riportata in molteplici contesti patologici, in cui un controllo trascrizionale dello sviluppo alterato può contribuire a proliferazione aberrante, blocco della differenziazione e cambiamenti di linea cellulare. In quanto regolatore nucleare che si lega al DNA, GBX2 è comunemente studiato per il suo ruolo nei circuiti trascrizionali, nella modulazione dello stato della cromatina e nel rimodellamento delle reti geniche dello sviluppo in modelli di cancro e cellule staminali.

GBX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GBX2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GBX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GBX2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GBX2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GBX2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GBX2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GBX2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GBX2 nelle cellule tumorali con espressione di GBX2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.