GAS41 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404113-ACT

YEATS4 codifica GAS41, uma proteína nuclear contendo domínio YEATS que atua como reguladora da transcrição associada à cromatina. GAS41 participa do remodelamento da cromatina e de vias de sinalização ligadas à acetilação de histonas, incluindo interações com complexos multiproteicos implicados na expressão gênica dependente da RNA polimerase II e no controle do ciclo celular. Por meio desses mecanismos epigenéticos, YEATS4 influencia a proliferação, a regulação do genoma e as respostas celulares ao estresse. A atividade desregulada de YEATS4/GAS41 tem sido relatada em contextos associados ao câncer, o que sustenta seu estudo em programas transcricionais oncogênicos e na biologia de doenças impulsionadas pela cromatina.

GAS41 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de YEATS4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GAS41 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus YEATS4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição YEATS4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GAS41. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus YEATS4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GAS41 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GAS41 em células tumorais com expressão de YEATS4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.