Plasmide Double Nickase (h) GAP-43: sc-400632-NIC

Le gène humain **GAP43** code la protéine associée à la croissance 43 (**GAP-43**), une phosphoprotéine associée à la membrane, enrichie dans les neurones, qui régule l’allongement axonal, la motilité du cône de croissance et la plasticité synaptique. GAP-43 est un substrat majeur de la protéine kinase C et participe au remodelage du cytosquelette ainsi qu’à la dynamique des vésicules et des membranes grâce à un contrôle dépendant de la phosphorylation de l’organisation de l’actine et de la signalisation à la membrane plasmique. Son expression est régulée au cours du développement et est réinduite lors des réponses aux lésions neuronales, reliant GAP-43 à des voies qui gouvernent la régénération des neurites et le remodelage des circuits dépendant de l’activité. Des altérations des niveaux de GAP-43 ou de son état de phosphorylation ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ce qui en fait un marqueur fréquemment étudié et un nœud mécanistique clé dans les travaux sur la connectivité neuronale et la réparation.

GAP-43 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GAP43 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GAP43. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GAP43. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GAP43.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.