GalNAc-T2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430824

概要

Galnt2 は、マウスのポリペプチド N-アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ GalNAc-T2 をコードしており、これはゴルジ体に局在する酵素で、分泌タンパク質および膜タンパク質のセリン／スレオニン残基に GalNAc を転移することで、ムチン型 O 結合型糖鎖付加（O-グリコシル化）を開始します。O-糖鎖の組成と密度を規定することで、GalNAc-T2 はタンパク質のフォールディング、プロテアーゼ感受性、受容体—リガンド相互作用、ならびに細胞外マトリックスの組織化に影響を与えます。この糖鎖付加プログラムは分泌経路の品質管理と連動しており、糖タンパク質の輸送や細胞表面での提示の変化を介して、シグナル伝達や細胞—細胞間コミュニケーションを調節し得ます。O-グリコシル化の異常は炎症、代謝表現型、腫瘍に伴う糖鎖リモデリングに広く関与するとされているため、Galnt2 は疾患機序に関連する糖タンパク質群（グリコプロテオーム）の変化を研究する上で有用な結節点となります。

GalNAc-T2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGalnt2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Galnt2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Galnt2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GalNAc-T2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GalNAc-T2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Galnt2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GalNAc-T2の機能に不可欠なGalnt2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Galnt2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GalNAc-T2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGalNAc-T2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Galnt2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GalNAc-T2 HDRプラスミド（m）および GalNAc-T2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGalnt2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGalnt2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。