GALE Plasmide Double Nickase (h): sc-408127-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GALE Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GALE Double Nickase Plasmid (h) e il GALE Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GALE. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GALE Antibody (C-4): sc-390407
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GALE Plasmide Double Nickase (h) | sc-408127-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GALE Plasmide Double Nickase (h2) | sc-408127-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GALE codifica l’UDP-galattosio-4-epimerasi, un enzima citosolico che interconvertisce in modo reversibile UDP-galattosio e UDP-glucosio e catalizza anche l’epimerizzazione UDP-GalNAc/UDP-GlcNAc necessaria per il metabolismo degli amminozuccheri. Attraverso queste reazioni, GALE sostiene la via di Leloir per l’utilizzo del galattosio e fornisce substrati zucchero-nucleotide per la glicosilazione, influenzando la biosintesi di proteoglicani e glicoproteine nella via secretoria. Un’alterazione dell’attività di GALE compromette l’omeostasi cellulare dei carboidrati e può modificare la composizione dei glicani, con effetti a valle sul ripiegamento, il traffico intracellulare e la segnalazione proteica. La disfunzione di GALE nell’uomo è associata a forme di galattosemia, rendendo questo gene un nodo utile per studiare, in sistemi modello, le risposte allo stress metabolico e i fenotipi legati alla glicosilazione.
GALE Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GALE nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GALE. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GALE. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GALE interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.