GAK CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404235-ACT

ヒトGAK（cyclin G–associated kinase）はセリン／スレオニンキナーゼであり、AP2アダプターおよびクラスリンコートのダイナミクスを制御することでクラスリン介在性エンドサイトーシスを調整し、その結果、受容体の内部化とトラフィッキングに影響を与えます。小胞の脱被覆（アンコーティング）やエンドソームでのソーティングを制御することを通じて、GAKは膜受容体からのシグナル出力に影響し、細胞のプロテオスタシスおよび膜恒常性の維持にも寄与します。さらに、その活性は、効率的な小胞輸送に依存する細胞周期関連の制御ネットワークやストレス応答性経路とも交差します。文献では、GAKの発現や機能の変化が神経変性やがんに関連する表現型と関連づけられており、疾患文脈における経路リモデリングを研究するための機構的ハブとしての有用性が支持されています。

GAK CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GAKの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GAK CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GAK 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGAK転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GAKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGAK遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGAK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGAK発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGAK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。