Particules Lentivirales d'Activation (h) G3BP2: sc-403630-LAC

G3BP2 (facteur 2 d’assemblage des granules de stress G3BP) est une protéine liant l’ARN qui sert d’échafaudage central pour la nucléation des granules de stress et le tri des ARNm, en coordonnant la stabilité des transcrits et leur traduction lors d’un stress cellulaire. Elle participe à des réseaux de régulation post‑transcriptionnelle liés à la signalisation de l’interféron, aux réponses immunitaires innées et à l’adaptation au stress oxydatif ainsi qu’au stress du réticulum endoplasmique, avec des effets en aval sur la progression du cycle cellulaire et les voies de survie. Par ses interactions avec des composants de la signalisation et du métabolisme de l’ARN, G3BP2 contribue à coupler les signaux environnementaux au remodelage des ribonucléoprotéines et au contrôle traductionnel. La dérégulation de la dynamique des granules de stress et de l’homéostasie de l’ARN impliquant G3BP2 a été associée à des processus pertinents pour les maladies, notamment la tolérance au stress des cellules tumorales, l’agrégation protéine/ARN liée aux neurodégénérescences et la signalisation inflammatoire.

Les particules d'activation lentivirales G3BP2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de G3BP2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales G3BP2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription G3BP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de G3BP2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif G3BP2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.