Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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G2A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401866
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- G2A O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico G2A, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:G2A Anticorpo (G-5): sc-137112
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
G2A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401866 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O GPR132 codifica o recetor acoplado à proteína G G2A, um sensor imunorregulador implicado no tráfego de leucócitos e nas respostas a sinais inflamatórios. O G2A pode ser ativado pela acidificação extracelular e por lípidos bioativos, como derivados de ácidos gordos oxidados, ligando o stress tecidular à sinalização por GPCR através de proteínas G heterotriméricas e de vias a jusante dependentes de MAPK e de cálcio. Em células imunitárias, a sinalização do G2A influencia a quimiotaxia, o estado de ativação e programas associados a citocinas que moldam microambientes inflamatórios. A expressão ou sinalização desregulada de GPR132 tem sido associada à inflamação crónica e a interações tumor–sistema imunitário, tornando-o relevante para estudos mecanísticos em imunologia e biologia do cancro.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO G2A (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GPR132 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GPR132, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GPR132 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína G2A.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GPR132 para a investigação da sinalização de G2A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GPR132 críticos para a função G2A
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GPR132 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo G2A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo G2A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GPR132. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo G2A Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR G2A (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GPR132 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GPR132 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.