FXR/NR1H4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417410-ACT

NR1H4は、リガンド依存性に活性化される核内受容体であるファルネソイドX受容体（FXR）をコードしており、胆汁酸の転写センサーとして機能して代謝関連遺伝子プログラムを統括します。肝細胞および腸上皮細胞（エンテロサイト）において、FXRは胆汁酸の合成と輸送（CYP7A1のフィードバック制御を含む）、脂質・糖代謝の恒常性、さらにSHP、FGF19/FGF15、NF-κBなどの経路とのクロストークを介した炎症シグナルを調節します。FXRの活性は腸肝循環を形作り、腸管バリア機能や腸—肝軸のコミュニケーションにも影響を与えます。NR1H4/FXRシグナルの破綻は、胆汁うっ滞性肝障害、非アルコール性脂肪性肝疾患、肝胆道系発がんに関与するとされており、代謝・炎症に関わる肝生物学の機序研究における重要な結節点となっています。

FXR/NR1H4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NR1H4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FXR/NR1H4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NR1H4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNR1H4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FXR/NR1H4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNR1H4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFXR/NR1H4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNR1H4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFXR/NR1H4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。