FTS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420422

概要

マウスのAktipはFTSタンパク質をコードしており、シェルテリン因子と会合してテロメアの完全性維持に寄与する、テロメア制御機構の構成要素です。FTSは、テロメラーゼのアクセス制御、テロメア長の恒常性、染色体末端の保護に関与することが示されており、その結果としてゲノム安定性や増殖能に影響を及ぼします。これらの役割を通じて、Aktip/FTSはDNA損傷応答および細胞周期チェックポイントのシグナル伝達とも交差し、染色体不安定性表現型やがん関連モデルでしばしば破綻するプロセスに関わります。FTSの機能を解明することは、マウス系における幹細胞の自己複製、複製ストレス、加齢に伴うテロメア機能不全の研究にとっても有用です。

FTS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAktip遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Aktip内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Aktipのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FTSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FTSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Aktip欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FTSの機能に不可欠なAktipエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Aktipゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FTS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFTS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Aktip遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FTS HDRプラスミド（m）および FTS HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAktipホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAktip標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。