Plasmide CRISPR/Cas9 KO FTα (h): sc-403920

Présentation

FNTA code la sous-unité alpha de la farnésyltransférase protéique (FTα), qui forme un hétérodimère avec FNTB afin de catalyser la farnésylation des protéines portant un motif CaaX en C-terminal. Cette modification lipidique favorise l’association aux membranes, le trafic subcellulaire et les interactions protéine–protéine de régulateurs essentiels de la signalisation, notamment les GTPases de la famille RAS et les lamines nucléaires. En contrôlant la localisation et la stabilité des substrats prénylés, FTα contribue à des voies régissant la prolifération, la dynamique du cytosquelette, le transport vésiculaire et les réponses au stress. Une prénylation dérégulée et une signalisation RAS/lamines aberrante ont été associées à une signalisation oncogénique, à des phénotypes de vieillissement prématuré et à d’autres troubles dans lesquels la signalisation dépendante des membranes et l’architecture nucléaire sont perturbées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FTα (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FNTA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FNTA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FNTA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FTα.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FNTA pour l'étude de la signalisation de FTα, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FNTA essentiels à la fonction de FTα
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FNTA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FTα plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FTα plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FNTA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FTα plasmide HDR (h) et le FTα (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FNTA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FNTA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.