FRP-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422898

概要

FrzbはFRP-3（secreted frizzled-related protein 3とも呼ばれる）をコードしており、Wntリガンドに結合してFrizzled受容体の活性化を弱め得る、Wntシグナル伝達の細胞外モジュレーターである。FRP-3は、カノニカルなβ-カテニン依存性転写とノンカノニカルWnt経路を調整することで、胚のパターニング、組織形態形成、ならびに骨・軟骨の恒常性を含む間葉系系譜の分化制御に寄与する。マウスモデルでは、FRP-3活性の変化が骨形成ダイナミクスや細胞外マトリックスのリモデリングの変化と関連づけられており、これらの過程は発生異常や退行性の表現型と結び付くことが多い。Wntシグナルは細胞運命決定や増殖制御と密接に結び付いているため、Frzbは、経路の不均衡が炎症に伴う組織リモデリングや腫瘍生物学に関与する文脈で広く研究されている。

FRP-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFrzb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Frzb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Frzbのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FRP-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FRP-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Frzb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FRP-3の機能に不可欠なFrzbエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Frzbゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FRP-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFRP-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Frzb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FRP-3 HDRプラスミド（m）および FRP-3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFrzbホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFrzb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。