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FRAS1CRISPR激活质粒(h) | sc-407225-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
FRAS1CRISPR激活质粒(h2) | sc-407225-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
FRAS1 编码一种与细胞外基质相关的蛋白,定位于上皮—间充质交界面,在胚胎发育过程中维持基底膜的完整性。它参与黏附与基质组织等过程,协调包括皮肤和肾脏泌尿道在内的上皮形态发生,并有助于在机械应力下稳定组织结构。FRAS1 功能受损与以多系统先天异常为特征的发育性疾病相关,体现了其在器官发生中的作用。在研究中,FRAS1 常用于探讨其在细胞外基质装配、上皮屏障形成以及塑造组织模式的发育信号网络中的贡献。
FRAS1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性FRAS1的表达。
FRAS1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的FRAS1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于FRAS1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性FRAS1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的FRAS1位点,并能够研究内源性位点上依赖于FRAS1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在FRAS1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟FRAS1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。